帶你走近細胞生物學(xué)世界的第一步——細胞培養(yǎng)

發(fā)布時間： 2021-10-21　　點擊次數(shù)： 1105次

細胞培養(yǎng)的概念：

細胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

細胞培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備：

倒置顯微鏡		便于掌握細胞的生長情況（細胞形態(tài)、大小、密度、結(jié)構(gòu)）并觀察有無污染等
細胞培養(yǎng)箱		可以精確地提供細胞培養(yǎng)需要的溫度、濕度、氣體環(huán)境，有效防止細胞污染
超凈工作臺		用于細胞培養(yǎng)實驗的無菌操作
低速離心機		制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞（800rpm-1000rpm，5min）
水浴鍋		用于細胞復(fù)蘇、預(yù)熱培養(yǎng)基等
移液槍		用于吸取、移動液體或滴加樣本
細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿		用于培養(yǎng)、繁殖細胞
細胞培養(yǎng)相關(guān)耗材		用于細胞培養(yǎng)實驗中收集細胞，保存細胞等

細胞培養(yǎng)所需的試劑：

培養(yǎng)基	為細胞提供營養(yǎng)，促進細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)
緩沖溶液	用于清洗細胞，去除沒有營養(yǎng)的舊培養(yǎng)基及細胞碎片等雜質(zhì)，為細胞提供適宜的pH作用及鹽平衡作用
血清	提供細胞生長和繁殖所需的生長因子、激素、各種蛋白、促進貼壁和伸展的因子及細胞傳代時所需的蛋白酶抑制劑和其他多種不明營養(yǎng)物質(zhì)
胰蛋白酶	使細胞之間的蛋白質(zhì)水解，從而使細胞分離，常用于細胞傳代
抗生素	防止細胞污染，使細胞在體外的無菌環(huán)境中更好的生長
凍存液	提高細胞膜對水的通透性，并且緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷，最大限度的保持細胞活力
其他添加成分	為不同的細胞培養(yǎng)條件提供特定的營養(yǎng)物質(zhì)

細胞培養(yǎng)的類別：

原代細胞(primary cell)是指從機體的組織中經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得、并在體外進行培養(yǎng)的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養(yǎng)的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。

細胞系(cell strain)：原代培養(yǎng)物經(jīng)胰酶等物質(zhì)第一次消化傳代后即為細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。

細胞株(cell line)：從細胞系中用單細胞分離培養(yǎng)或篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代有限，稱為有限細胞株；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細胞株。

細胞培養(yǎng)的過程：

細胞復(fù)蘇：

將凍存的細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動直到*融化后放入離心機中，800rpm-1000rpm，5min，然后在超凈臺中將上清液棄掉，加入1ml預(yù)熱的培養(yǎng)基，輕輕吹勻后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，補足細胞生長所需的培養(yǎng)基，呈“十"混勻后放入含5%CO₂的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞傳代：

待細胞密度達到80%~90%時，棄去原培養(yǎng)基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱中（不同的細胞消化時間不同）。待細胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養(yǎng)基進行中和，輕輕吹吸混勻，根據(jù)細胞生長特性進行1：2或1：3傳代培養(yǎng)。

細胞凍存：

待細胞密度達到80%~90%時，棄去原培養(yǎng)基，用5ml PBS清洗3次。加入一定量含0.25% EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱中（不同的細胞消化時間不同）。待細胞消化*后加入胰蛋白酶的3倍體積的含血清培養(yǎng)基進行中和，輕輕吹吸混勻，轉(zhuǎn)移到離心管中800rpm-1000rpm，5min進行離心，然后在超凈臺中將上清液棄掉，加入1ml凍存液，放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇，以保證梯度降溫），立即放入一80℃冰箱內(nèi)，第二天轉(zhuǎn)入液氮中，可以保存至少兩年。