zeta life轉染脂肪間充質干細胞(ADMSCs)(IF6.684)文章分享

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一、轉染犬/狗脂肪間充質干細胞(ADMSCs）siRNA基因沉默 簡述

 熒光素標記的siRNA（小干擾 RNA）每個基因設計有三個siRNA，使用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑（Zeta Life，Menlo Park，CA，United States）用siRNA轉染犬/狗脂肪間充質干細胞(ADMSCs),RT-qPCR用于檢測siRNA 的沉默效率，并選擇沉默效率為最高的一種，在整個轉染過程中，該基因每7天轉染一次以保持沉默。

二、轉染犬/狗脂肪間充質干細胞(ADMSCs）基因過表達 簡述

使用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑（Zeta Life，Menlo Park，CA,USA）轉染AAV-293細胞收集重組腺病毒顆粒并感染犬/狗脂肪間充質干細胞(ADMSCs)，用 RT-qPCR和蛋白質印跡檢測目的基因的表達。

三、培養(yǎng)條件 簡述

 脂肪間充質干細胞(ADMSCs),使用美國Zeta Life公司z7010FBS-500胎牛血清培養(yǎng)。

四、Adenovirus-Mediated Gene Overexpression原文分享

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The cDNA sequences for genes were synthesized by Wuhan Gene Create Biological Engineering Co., Ltd. (Wuhan, China). The cDNA for each gene was PCR-amplifified and inserted into pAdTrack-CMV previously digested with BglII/HindIII using the In-Fusion HD cloning kit (Takara, Japan) (Sleight et al., 2010). The resulting plasmid was linearized with PmeI, and then homologous recombination was performed with pAdeasy-1 in E. coli BJ5183. The recombinant plasmid with PacI linearization was used to transfect AAV-293 cells to

produce recombinant adenovirus particles using the Advanced DNA RNA transfection reagent (Zeta Life, Menlo Park, CA, United States). RT-qPCR (Nolan et al., 2006) and Western-blot (following the Elabscience Western blot detection kit operation manual) were used to detect the expression of target gene. The canine ADMSCs were transfected with the recombinant adenovirus particles.

五、siRNA-Mediated Gene Silencing原文分享

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Fluorescein-labeled siRNA . Each gene was designed with three siRNAs. In the process of transdifffferentiation, the canine ADMSCs were transfected with siRNAs using the Advanced DNA RNA transfection reagent (Zeta Life, Menlo Park, CA, United States). RT-qPCR (Nolan et al., 2006) was used to detect the silencing effiffifficiency of siRNAs and the one with the highest silencing effiffifficiency was selected. The gene was silenced every 7 days throughout the transdifffferentiation to keep it silent.

六、美國Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑，此技術成為新的蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產的主要關鍵技術之一。

七、文獻中所用轉染試劑產品信息

產品名稱：Advanced DNA RNA 轉染試劑

貨號：AD600025、AD600050、AD600075、AD600150

規(guī)格：0.25ML、0.5ML、0.75ML、1.5ML

安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國代理商。Advanced DNA RNA轉染試劑，均經過反復充分驗證，轉染效果好且重復性佳，提供完整售后服務和技術支持。

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安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。