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    植物原生質(zhì)體的制備

    發(fā)布時間： 2023-01-29　　點擊次數(shù)： 1078次

    原理

    去掉植物細(xì)胞壁的方法可以是機(jī)械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機(jī)械法制備原生質(zhì)體的首-推Klercker（1892），直到1960 年英國科學(xué)家Cocking 才第一次用酶法大量制備原生質(zhì)體。本實驗以植物的葉肉組織為材料，利用纖維素酶和果膠酶來消化細(xì)胞壁，分離細(xì)胞。

    材料與儀器

    油菜或菠菜或煙草
    氯化鈣 蒸餾水 2蔗糖 酶解液
    顯微鏡 離心機(jī) 離心管 剪刀 鑷子 吸管 培養(yǎng)皿 載玻片 蓋玻片

    步驟

    1、取材 根據(jù)實驗?zāi)康暮蜅l件選取不同的材料

     

    2、分離原生質(zhì)體

     

    （1） 撕葉下表皮

     

    （2）酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊，放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25——28℃下酶解60——90 分鐘

     

    3、收集純化

     

    （1）用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中，以600rpm 離心5 分鐘以上，使原生質(zhì)體沉降

     

    （2）將上清（酶解液）回收，剩下原生質(zhì)體及殘渣于管底

     

    （3）加氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻

     

    （4）用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質(zhì)體懸浮液

     

    （5）以600rpm 離心10 分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體

     

    4、觀察或培養(yǎng)

     

    取少許原生質(zhì)體于載片上，蓋片觀察其形態(tài)，或者將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，再生植株。

    注意事項

    要培養(yǎng)懸浮細(xì)胞系需較長時間。因此,應(yīng)著重改善培養(yǎng)條件,主要包括選用合適 的培養(yǎng)基 包括培養(yǎng)基 種類 、添加物 、激素種類及水平等 及培養(yǎng)方式 根 據(jù)培養(yǎng)物狀態(tài)適時改換適宜培養(yǎng)基 選擇合適的外植體及誘導(dǎo)時期 。

    常見問題

    原生質(zhì)體是裸露的、具有生命活性的細(xì)胞,體內(nèi)包裹著細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)等, 因此原生質(zhì)體具有再生細(xì)胞壁、進(jìn)行連續(xù)分裂并生成完整植株的能力 , 即具有細(xì)胞全*性。原生質(zhì) 體能 攝 人 如 DNA、質(zhì)粒 、病毒 、細(xì)菌 、細(xì)胞器等外源物質(zhì) , 是植物細(xì)胞工程進(jìn)行遺傳操作 、基因轉(zhuǎn)移的良好材料 。

     

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