欧美日韩精品在线,亚洲性喷水,九久国产免费,亚洲AV无码国产精品午友情链接

銷售熱線

19126518388

  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > CHO-K1倉鼠卵巢細胞株的培養(yǎng)方法

    CHO-K1倉鼠卵巢細胞株的培養(yǎng)方法

    發(fā)布時間： 2024-04-10　　點擊次數(shù)： 456次

    中國倉鼠卵巢（Chinese hamster ovary, CHO）細胞是第一個被美國FDA、歐盟EMA和中國CFDA認可的用于生物制藥領(lǐng)域的生產(chǎn)細胞，已廣泛應(yīng)用于各種治療性蛋白質(zhì)藥物的大規(guī)模制備，包括重組抗體、重組單體蛋白質(zhì)以及重組融合蛋白質(zhì)等。CHO-K1是未經(jīng)改造的野生型CHO細胞。最原始的CHO-K1細胞是貼壁培養(yǎng)，并需要添加血清，由于血清的批間穩(wěn)定性問題，及后來病毒安全性問題，無血清懸浮培養(yǎng)成為趨勢。實驗室常以貼壁的CHO K1細胞構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。

     

                                    圖片


    細胞形態(tài)：長梭形（10×倍鏡）
    培養(yǎng)條件：DMEM/F12培養(yǎng)基，胎牛血清終濃度為10%
    培養(yǎng)溫度：37°C

    細胞復(fù)蘇：


    1.在攝氏37度的水浴中輕輕攪動，為防止受到污染，不要把O形環(huán)和蓋子放在外面。解凍應(yīng)迅速（約2分鐘）。
    2.解凍后把凍存管盡快從水中拿出來，用75% 乙醇浸泡或噴灑消毒乙醇。從現(xiàn)在開始所有的操作都應(yīng)該進行在嚴(yán)格的無菌條件下進行。
    3.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到含有9 ml（血清）細胞培養(yǎng)基的離心管中，10000 rpm離心5分鐘。
    4.棄上清，用（血清）細胞培養(yǎng)基重懸細胞，轉(zhuǎn)移至T25細胞培養(yǎng)瓶中。
    注意：在T25瓶加入細胞之前，可以先將包含（血清）細胞培養(yǎng)基的容器放入培養(yǎng)箱內(nèi)至少15分鐘，以便培養(yǎng)基達到正常PH（7.0至7.6）。
    5.將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


    細胞傳代：


    1.棄去培養(yǎng)基，用PBS沖洗兩遍細胞層，以消除所有痕量的血清。
    2.加入2.0 ~ 3.0 mL  0.25%（w/v）胰蛋白酶溶液消化細胞，在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層分散。
    注意：為了避免結(jié)塊，請不要通過擊打或搖晃瓶子?？稍?7℃培養(yǎng)箱等待細胞，加快細胞分散的速度。
    3.加入6 - 8 mL的（血清）細胞培養(yǎng)基終止消化并反復(fù)吹打，轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 5 min。
    注意：（血清）細胞培養(yǎng)基里有血清，血清里過量的血清蛋白與胰酶結(jié)合，競爭性抑制，使胰酶無法繼續(xù)消化細胞。
    4.  棄上清，添加新的培養(yǎng)基重懸細胞，向培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中添加適當(dāng)?shù)募毎麘腋∫海⒀a充新鮮（血清）細胞培養(yǎng)基。
    5. 將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
    注意：ATCC建議傳代比例為：1:4至1:8。


    細胞凍存：


    1.當(dāng)細胞處于對數(shù)生長期時，可進行細胞凍存。
    注意：常見的細胞凍存密度是1-10*10^6 cells/mL。
    2.棄去培養(yǎng)基，用PBS沖洗兩遍細胞層，以消除所有痕量的血清和細胞生長過程中產(chǎn)生的廢料。
    3.加入2.0 ~ 3.0 mL 0.25%（w/v）胰蛋白酶溶液消化細胞，在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層分散。
    4.加入適量的（血清）細胞培養(yǎng)基終止消化，槍頭反復(fù)吹打混勻后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 5 min。
    5.棄上清，依次加入700 μL培養(yǎng)基，200 μL胎牛血清重懸細胞，最后添加 10% DMSO 后梯度降溫凍存。

    注意：DMSO加到細胞里會迅速放熱，對細胞活力造成損傷，因此可以選擇在最后一步添加，加完迅速轉(zhuǎn)移至低溫。

    以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

    安培生物致力成為推動生命科學(xué)進步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


    可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)。









產(chǎn)品中心 Products